Laboratório de Orientação e Diagnóstico Testing
A dengue pode ser diagnosticada por isolamento do vírus, por testes sorológicos, ou por métodos moleculares. Diagnóstico da doença aguda (em curso) ou infecção recente por dengue pode ser estabelecida por meio de testes durante a fase aguda (primeiros 5 dias de sintomas) e ou início da fase de convalescença fases (mais de 5 dias dos sintomas) specimensof diagnóstico da doença. A infecção aguda pelo vírus da dengue é confirmada quando o vírus é isolado de soro ou amostras de tecido de autópsia, ou específico do genoma do vírus da dengue é identificada por transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) em soro ou plasma, líquido cefalorraquidiano, ou autópsia do tecido espécimes durante uma doença febril aguda. Métodos como um passo, em tempo real RT-PCR ou nested RT-PCR são agora amplamente utilizados para detectar dengue em genes virais agudas amostras de soro de fase. A detecção do genoma do dengue coincide com a viremia e da fase febril da illnessonset de vermeil. Infecção aguda também pode ser confirmado pelo laboratório de identificação do vírus da dengue antígeno ou RNA em amostras de tecido de autópsia por imunofluorescência ou imunohistoquímica ou por soroconversão de negativo para anticorpos IgM positivo para dengue ou demonstração de um aumento de quatro vezes ou mais no título de anticorpos IgG em amostras pareadas (aguda e convalescente) amostras de soro.
Pacientes que estão se anticorpos IgM para dengue detectados em amostra de soro, através de uma enzima de captura de anticorpos IgM-linked immunosorbent assay (MAC-ELISA) e tiveram o 1.) A RT-PCR negativos no resultado da amostra da fase aguda ou 2.) Did não apresentar uma amostra da fase aguda, são classificadas como tendo um provável infecção recente por dengue. Isto é devido ao fato de que os anticorpos IgM para dengue permanecem elevados durante 2 a 3 meses após a doença. Devido a isso, a IgM elevado poderia ser o resultado de uma infecção que ocorreu 2 a 3 meses atrás. Além disso, há uma cruz reatividade com outros flavivírus, incluindo vírus do Nilo Ocidental (WNV), vírus da encefalite de St. Louis (SLE), eo vírus da Febre Amarela (FA). Devido a isso, o provedor necessita para analisar o passado histórico médico do paciente, história de viagem recente, e registro de vacinação (especialmente a vacinação contra febre amarela) para determinar a probabilidade de que a doença febril aguda atual é devido a uma infecção com o vírus da dengue.
Muitas vezes um tanto espécimes fase aguda e convalescente são necessários para fazer um diagnóstico de infecção por dengue. Isto é especialmente verdadeiro para aqueles que apresentarem um dia 5 espécime aguda porque os vírus e os anticorpos IgM podem estar em níveis indetectáveis. Portanto, se um paciente com suspeita de infecção por dengue apresenta um modelo final de fase aguda, que é negativo (por exemplo, RT-PCR e MAC-ELISA), e eles não apresentarem uma amostra convalescente, eles são classificados como um laboratório caso indeterminado.
I. Immunological Response to Dengue Infecção
A resposta imune adquirida na sequência de uma infecção por dengue consiste na produção de anticorpos IgG e IgM dirigidos principalmente contra as proteínas do envelope do vírus. A resposta imune varia dependendo se o indivíduo tem uma dengue (primeira primária ou infecção de outros flavivírus) versus um secundário (tinha dengue ou outra infecção flavivirus no passado) infecção por dengue. Em geral, o diagnóstico da dengue depende do phasestage da infecção. O cronograma geral de uma infecção primária de isolamento do vírus ou de identificação, a detecção de IgM seguido por detecção de IgG é a seguinte: A infecção por dengue primária é caracterizada por uma lenta e resposta de anticorpos de baixo título. Anticorpos IgM é o isotipo de imunoglobulinas primeiro a aparecer. IgG anti-dengue é detectável em baixo título no final da primeira semana da doença, e aumenta lentamente. Em contrapartida, durante uma infecção secundária, os títulos de anticorpos ascensão extremamente rápida e amplamente o anticorpo reage com muitos flavivírus. Altos níveis de IgG são detectáveis, mesmo na fase aguda e sobem drasticamente ao longo do processo de duas semanas. A cinética da resposta de IgM é mais variável. Níveis de IgM são significativamente mais baixos em infecções por dengue secundárias e, portanto alguns anti-dengue IgM reações falso-negativos são observados durante infecções secundárias. Segundo a Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) Orientações 80% dos casos de dengue foram detectados anticorpos IgM detectável por cinco dias de doença, e 93-99% dos casos IgM detectável por seis a dez dias de doença, que pode então permanecer detectável por mais 90 dias.
MAC-ELISA tornou-se uma importante ferramenta para o diagnóstico da dengue rotina, MAC-ELISA tem uma sensibilidade e especificidade de aproximadamente 90% e 98%, respectivamente, mas apenas quando utilizados cinco ou mais dias após o início da febre (ou seja, na fase de convalescença). Diferentes formatos, como ELISA de captura, captura ultramicroELISA, dot-ELISA, AuBioDOT captura de IgM e sondas têm sido desenvolvidos. Soros, sangue em papel filtro e saliva (mas não na urina) são úteis para detecção de IgM se as amostras são tomadas em fase de convalescença da doença (Vasquez et al., 2006). Uma variedade de diferentes kits comerciais está disponível com variável sensibilidade e especificidade. Diagnóstico da dengue se torna ainda mais difícil porque os anticorpos IgM dengue também reagem de forma cruzada, em certa medida com outros flavivírus, como o vírus da encefalite japonesa, LES, WNV e YFV.
II. Classic Testing Algorithms for Dengue:
a. MAC ELISA
O teste sorológico para dengue clássico inclui o MAC (-ELISA). Este ensaio utiliza dengue antígenos específicos de todos os quatro sorotipos (DEN 1-4) para a captura de anti-dengue IgM anticorpos específicos em amostras de soro. A maioria dos antígenos utilizados para este ensaio são derivados da proteína de envelope. Algumas das limitações do presente ensaio é a especificidade desses antígenos e reactividade cruzada entre outros flavivírus circulantes. Estas limitações devem ser contabilizados quando se trabalha em regiões onde a co-circulam vários flavivírus. Detecção de IgM não é útil para a determinação de sorotipo devido a reatividade cruzada do anticorpo se mesmo durante a infecção primária.
O teste sorológico para dengue clássico inclui o MAC (-ELISA). Este ensaio utiliza dengue antígenos específicos de todos os quatro sorotipos (DEN 1-4) para a captura de anti-dengue IgM anticorpos específicos em amostras de soro. A maioria dos antígenos utilizados para este ensaio são derivados da proteína de envelope. Algumas das limitações do presente ensaio é a especificidade desses antígenos e reactividade cruzada entre outros flavivírus circulantes. Estas limitações devem ser contabilizados quando se trabalha em regiões onde a co-circulam vários flavivírus. Detecção de IgM não é útil para a determinação de sorotipo devido a reatividade cruzada do anticorpo se mesmo durante a infecção primária.
b. IgG ELISA
O clássico IgG ELISA utilizados para a detecção de uma infecção por dengue passado utiliza os mesmos antígenos como o ELISA MAC. O ensaio é geralmente realizado com várias diluições dos soros testados para determinar um ponto final de diluição. Este ensaio se correlaciona com a hemaglutinação (HI), previamente utilizado. Quanto maior o ponto final de diluição, a resposta mais robusto foi obtido a partir da infecção. Em geral IgG ELISA carece de especificidade no seio dos grupos serocomplex flavivirus. Determinação da infecção primária versus secundária de dengue pode ser determinado usando um algoritmo simples em que há uma soroconversão de um modelo agudo com um modelo de convalescença ou um aumento de quatro vezes no título de IgG entre uma amostra aguda e convalescente de um exemplar com pelo menos 7 dias de intervalo entre a coleta dos espécimes.
O clássico IgG ELISA utilizados para a detecção de uma infecção por dengue passado utiliza os mesmos antígenos como o ELISA MAC. O ensaio é geralmente realizado com várias diluições dos soros testados para determinar um ponto final de diluição. Este ensaio se correlaciona com a hemaglutinação (HI), previamente utilizado. Quanto maior o ponto final de diluição, a resposta mais robusto foi obtido a partir da infecção. Em geral IgG ELISA carece de especificidade no seio dos grupos serocomplex flavivirus. Determinação da infecção primária versus secundária de dengue pode ser determinado usando um algoritmo simples em que há uma soroconversão de um modelo agudo com um modelo de convalescença ou um aumento de quatro vezes no título de IgG entre uma amostra aguda e convalescente de um exemplar com pelo menos 7 dias de intervalo entre a coleta dos espécimes.
c. Plaque Reduction Neutralization Test e (PRNT) e os microneutralização
PRNT pode ser usado quando um diagnóstico sorológico específico é necessário, como neste ensaio é a ferramenta mais sorológico específico para a determinação dos anticorpos da dengue (Calisher et al., 1989). O teste de PRNT é usado para determinar o sorotipo infectante no soro convalescente. Este ensaio mede a titulação de anticorpos neutralizantes no soro do indivíduo infectado e determina o nível de protecção para este indivíduo tinha o vírus infectante. O ensaio é baseado no princípio da interação do vírus e anticorpos, resultando em inativação do vírus de tal forma que já não é capaz de infectar e replicar em cultura celular. Alguns dos variabilidade deste ensaio são as diferenças na interpretação dos resultados por causa das linhas de células e sementes de vírus utilizada, bem como a diluição do soro.
PRNT pode ser usado quando um diagnóstico sorológico específico é necessário, como neste ensaio é a ferramenta mais sorológico específico para a determinação dos anticorpos da dengue (Calisher et al., 1989). O teste de PRNT é usado para determinar o sorotipo infectante no soro convalescente. Este ensaio mede a titulação de anticorpos neutralizantes no soro do indivíduo infectado e determina o nível de protecção para este indivíduo tinha o vírus infectante. O ensaio é baseado no princípio da interação do vírus e anticorpos, resultando em inativação do vírus de tal forma que já não é capaz de infectar e replicar em cultura celular. Alguns dos variabilidade deste ensaio são as diferenças na interpretação dos resultados por causa das linhas de células e sementes de vírus utilizada, bem como a diluição do soro.
O ensaio microneutralização é baseado no mesmo princípio, porém, em vez de contar o número de placas por bem o ensaio utiliza uma medição colorimétrica do vírus da lise celular induzida para determinar o ponto final de diluição. Este ensaio foi desenvolvido para utilizar os reagentes menos e para a alta taxa de transferência para fins de maior número de amostras para testes. Algumas das limitações do ensaio de incluir os aspectos quantitativos da PRNT clássico.
Laboratório de Orientação e Diagnóstico:
A dengue pode ser diagnosticada por isolamento do vírus, por testes sorológicos, ou por métodos moleculares. Diagnóstico da Aguda curso (em) ou infecção recente por dengue pode ser Estabelecida por meio de testes durante a fase aguda (primeiros 5 dias de sintomas) e ou início da fase de convalescença, mais de 5 dias dos sintomas. A infecção aguda pelo vírus da dengue é confirmada quando o vírus é isolado de soro ou amostras de tecido de autópsia, ou específicas do genoma do vírus da dengue é identificada por transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) em soro ou plasma, líquido cefalorraquidiano, autópsia ou do tecido espécimes durante uma doença febril aguda. Métodos como um passo, em tempo real RT-PCR ou nested RT-PCR São agora Amplamente utilizados para Detectar genes virais agudas dengue em amostras de soro de fase. A detecção do genoma do dengue coincide com uma viremia e da fase febril da illnessonset de vermeil. Infecção aguda pode também ser confirmado pelo laboratório de identificação do vírus da dengue antígeno ou RNA em amostras de tecido de autópsia por imunofluorescência ou por Imunohistoquímica ou soroconversão de negativo para anticorpos IgM positivo para dengue ou demonstração de um aumento de quatro vezes ou mais no título de anticorpos IgG em amostras pareadas (aguda e convalescente) amostras de soro. Pacientes que estão se anticorpos IgM para dengue detectados em amostra de soro, Através de uma enzima de captura de anticorpos IgM-linked immunosorbent assay (MAC-ELISA) e o Tiveram 1.) A RT-PCR negativos nenhum resultado da amostra da fase aguda ou 2.) Será que não Apresentar uma amostra da fase aguda, são classificadas como tendo um provável infecção recente por dengue. Isto é devido ao fato de que os anticorpos IgM para dengue Elevados permanecem durante 2 a 3 meses após uma doença. Devido a isso, a IgM elevado poderia ser o resultado de uma infecção que ocorreu 2 a 3 meses atrás. Além disso, há uma cruz com outros flavivírus reatividade, incluindo vírus do Nilo Ocidental (WNV), vírus da encefalite de St. Louis (SLE), eo vírus da Febre Amarela (FA). Devido a isso, o provedor Necessita para Analisar o passado histórico médico do paciente, história recente de viagem, e registro de vacinação (especialmente a vacinação contra febre amarela) para Determinar uma probabilidade de que uma doença febril aguda atual é devida um com uma infecção O vírus da dengue. Muitas vezes um tanto espécimes fase aguda e convalescente São Necessários para fazer um diagnóstico de infecção por dengue. Isto é especialmente verdadeiro Para aqueles que um dia apresentarem 5 Espécime aguda porque os vírus e os anticorpos IgM pueden estar Níveis indetectáveis em. Portanto, se um paciente com suspeita de infecção por dengue apresenta um modelo final de fase aguda, que é negativo (por exemplo, RT-PCR e MAC-ELISA), e eles não apresentarem uma amostra convalescente, eles são classificados como caso um laboratorio indeterminado.
I. Immunological Response to Dengue Infecção
A resposta imune adquirida na sequência de uma infecção por dengue Consiste na produção de anticorpos IgG e IgM dirigidos principalmente contra as proteínas do envelope do vírus. A resposta imune varia Dependendo se o indivíduo tem uma dengue (primeira primária ou infecção de outros flavivírus) versus secundário (um tinha dengue ou outra infecção flavivirus não passado) infecção por dengue. Em geral, o diagnóstico da dengue depende do phasestage da infecção. O cronograma geral de uma infecção primária de isolamento do vírus ou de identificação, a detecção de IgM seguido por detecção de IgG é a seguinte: A infecção por dengue primária é Caracterizada por uma lenta e resposta de anticorpos de baixo título. Anticorpos IgM é o isotipo de imunoglobulinas aparecer primeiro um. IgG anti-dengue é em baixo detectável no título final da primeira semana da doença, e aumenta lentamente. Em contrapartida, durante uma infecção secundária, os títulos de anticorpos ascensão extremamente rápida e Amplamente o anticorpo reage com muitos flavivírus.Altos Níveis de IgG são detectáveis, mesmo na fase aguda e sobem drasticamente ao longo do processo de duas semanas. A cinética da resposta de IgM é mais variável. Níveis de IgM são significativamente mais baixos em infecções por dengue e secundárias, portanto alguns anti-dengue IgM reações falso-negativos são observados durante infecções secundárias.Segundo a Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) Orientações dos 80% de casos de dengue foram detectados anticorpos IgM detectável por cinco dias de doença, e 93-99% dos casos IgM detectável por seis dez dias de uma doença, que pode então Permanecer detectável por mais 90 dias. MAC-ELISA Tornou-se uma importante Ferramenta para o diagnóstico da dengue rotina, MAC-ELISA tem uma sensibilidade e especificidade de aproximadamente 90% e 98% respectivamente, mas apenas quando utilizados cinco ou mais dias após o início da febre (ou seja , na fase de convalescença).Diferentes formatos, como ELISA de captura, captura ultramicroELISA, dot-ELISA, AuBioDOT Captura de sondas e IgM Desenvolvidos Têm sido. Soros, papel filtro em sangue e saliva não (mas na urina) são úteis para detecção de IgM se como amostras são Tomadas em fase de convalescença da doença (Vasquez et al., 2006). Uma Variedade de diferentes kits comerciais com sensibilidade está disponível variável e especificidade. Diagnóstico da dengue se torna ainda mais difícil porque os anticorpos IgM dengue também reagem de forma cruzada, em certa medida flavivirus com outros, como o vírus da encefalite japonesa, LES, WNV e YFV.
A dengue pode ser diagnosticada por isolamento do vírus, por testes sorológicos, ou por métodos moleculares. Diagnóstico da Aguda curso (em) ou infecção recente por dengue pode ser Estabelecida por meio de testes durante a fase aguda (primeiros 5 dias de sintomas) e ou início da fase de convalescença, mais de 5 dias dos sintomas. A infecção aguda pelo vírus da dengue é confirmada quando o vírus é isolado de soro ou amostras de tecido de autópsia, ou específicas do genoma do vírus da dengue é identificada por transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) em soro ou plasma, líquido cefalorraquidiano, autópsia ou do tecido espécimes durante uma doença febril aguda. Métodos como um passo, em tempo real RT-PCR ou nested RT-PCR São agora Amplamente utilizados para Detectar genes virais agudas dengue em amostras de soro de fase. A detecção do genoma do dengue coincide com uma viremia e da fase febril da illnessonset de vermeil. Infecção aguda pode também ser confirmado pelo laboratório de identificação do vírus da dengue antígeno ou RNA em amostras de tecido de autópsia por imunofluorescência ou por Imunohistoquímica ou soroconversão de negativo para anticorpos IgM positivo para dengue ou demonstração de um aumento de quatro vezes ou mais no título de anticorpos IgG em amostras pareadas (aguda e convalescente) amostras de soro. Pacientes que estão se anticorpos IgM para dengue detectados em amostra de soro, Através de uma enzima de captura de anticorpos IgM-linked immunosorbent assay (MAC-ELISA) e o Tiveram 1.) A RT-PCR negativos nenhum resultado da amostra da fase aguda ou 2.) Será que não Apresentar uma amostra da fase aguda, são classificadas como tendo um provável infecção recente por dengue. Isto é devido ao fato de que os anticorpos IgM para dengue Elevados permanecem durante 2 a 3 meses após uma doença. Devido a isso, a IgM elevado poderia ser o resultado de uma infecção que ocorreu 2 a 3 meses atrás. Além disso, há uma cruz com outros flavivírus reatividade, incluindo vírus do Nilo Ocidental (WNV), vírus da encefalite de St. Louis (SLE), eo vírus da Febre Amarela (FA). Devido a isso, o provedor Necessita para Analisar o passado histórico médico do paciente, história recente de viagem, e registro de vacinação (especialmente a vacinação contra febre amarela) para Determinar uma probabilidade de que uma doença febril aguda atual é devida um com uma infecção O vírus da dengue. Muitas vezes um tanto espécimes fase aguda e convalescente São Necessários para fazer um diagnóstico de infecção por dengue. Isto é especialmente verdadeiro Para aqueles que um dia apresentarem 5 Espécime aguda porque os vírus e os anticorpos IgM pueden estar Níveis indetectáveis em. Portanto, se um paciente com suspeita de infecção por dengue apresenta um modelo final de fase aguda, que é negativo (por exemplo, RT-PCR e MAC-ELISA), e eles não apresentarem uma amostra convalescente, eles são classificados como caso um laboratorio indeterminado.
I. Immunological Response to Dengue Infecção
A resposta imune adquirida na sequência de uma infecção por dengue Consiste na produção de anticorpos IgG e IgM dirigidos principalmente contra as proteínas do envelope do vírus. A resposta imune varia Dependendo se o indivíduo tem uma dengue (primeira primária ou infecção de outros flavivírus) versus secundário (um tinha dengue ou outra infecção flavivirus não passado) infecção por dengue. Em geral, o diagnóstico da dengue depende do phasestage da infecção. O cronograma geral de uma infecção primária de isolamento do vírus ou de identificação, a detecção de IgM seguido por detecção de IgG é a seguinte: A infecção por dengue primária é Caracterizada por uma lenta e resposta de anticorpos de baixo título. Anticorpos IgM é o isotipo de imunoglobulinas aparecer primeiro um. IgG anti-dengue é em baixo detectável no título final da primeira semana da doença, e aumenta lentamente. Em contrapartida, durante uma infecção secundária, os títulos de anticorpos ascensão extremamente rápida e Amplamente o anticorpo reage com muitos flavivírus.Altos Níveis de IgG são detectáveis, mesmo na fase aguda e sobem drasticamente ao longo do processo de duas semanas. A cinética da resposta de IgM é mais variável. Níveis de IgM são significativamente mais baixos em infecções por dengue e secundárias, portanto alguns anti-dengue IgM reações falso-negativos são observados durante infecções secundárias.Segundo a Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) Orientações dos 80% de casos de dengue foram detectados anticorpos IgM detectável por cinco dias de doença, e 93-99% dos casos IgM detectável por seis dez dias de uma doença, que pode então Permanecer detectável por mais 90 dias. MAC-ELISA Tornou-se uma importante Ferramenta para o diagnóstico da dengue rotina, MAC-ELISA tem uma sensibilidade e especificidade de aproximadamente 90% e 98% respectivamente, mas apenas quando utilizados cinco ou mais dias após o início da febre (ou seja , na fase de convalescença).Diferentes formatos, como ELISA de captura, captura ultramicroELISA, dot-ELISA, AuBioDOT Captura de sondas e IgM Desenvolvidos Têm sido. Soros, papel filtro em sangue e saliva não (mas na urina) são úteis para detecção de IgM se como amostras são Tomadas em fase de convalescença da doença (Vasquez et al., 2006). Uma Variedade de diferentes kits comerciais com sensibilidade está disponível variável e especificidade. Diagnóstico da dengue se torna ainda mais difícil porque os anticorpos IgM dengue também reagem de forma cruzada, em certa medida flavivirus com outros, como o vírus da encefalite japonesa, LES, WNV e YFV.
II. Classic Testing Algorithms for Dengue:
a. MAC ELISA
O teste sorológico para dengue clássico inclui o MAC (-ELISA).Este ensaio utiliza dengue antígenos específicos de todos os quatro sorotipos (DEN 1-4) para a captura de anticorpos anti-dengue IgM específicos em amostras de soro. A maioria dos antígenos utilizados para este ensaio são derivados da proteína de envelope. Algumas das limitações do presente ensaio é a especificidade desses antígenos e reactividade cruzada entre outros flavivírus circulantes. Estas limitações Devem ser contabilizados quando se trabalha em Regiões onde vários co-circulam flavivírus. Detecção de IgM não é útil para uma determinação de sorotipo Devido a reatividade cruzada do anticorpo se mesmo durante uma infecção primária.
b. IgG ELISA
O clássico IgG ELISA utilizados para uma detecção de uma infecção por dengue passado utiliza os mesmos antígenos como o ELISA MAC. O ensaio Geralmente é realizado com várias diluições dos soros testados para Determinar um ponto final de diluição. Este ensaio se correlaciona com um Hemaglutinação (HI), previamente utilizado. Quanto maior o ponto final de diluição, uma resposta mais robusto foi obtido a partir da infecção. Em geral IgG ELISA carece de especificidade não seio dos grupos serocomplex flavivirus. Determinação da infecção primária versus secundária de dengue pode ser determinado usando um algoritmo simples em que há uma soroconversão de um modelo com um modelo agudo de convalescença Aumento de um ou quatro vezes no título de IgG entre uma amostra aguda e convalescente de um exemplar com pelo menos 7 dias de intervalo entre uma coleta dos espécimes.
c. Plaque Reduction Neutralization e Test (PRNT) e os microneutralização
PRNT pode ser usado quando um diagnóstico sorológico específico é necessário, como neste ensaio é a Ferramenta mais sorológico específico para uma determinação dos anticorpos da dengue (Calisher et al., 1989). O teste de PRNT é usado para Determinar o sorotipo infectante no soro convalescente. Este ensaio mede uma titulação de anticorpos neutralizantes no soro do indivíduo infectado e determina o nível de Protecção para este indivíduo tinha o vírus infectante. O ensaio é Baseado no Princípio da interação do vírus e anticorpos, resultando em inativação do vírus de tal forma que já não é Capaz de infectar e replicar em cultura celular. Alguns dos variabilidade deste ensaio são as diferenças na interpretação dos resultados por causa das linhas de células e sementes de vírus utilizada, bem como uma diluição do soro. O ensaio é micro neutralização “Princípio Baseado” no mesmo, porém, em vez de contar o número de placas por bem o ensaio utiliza uma medição colorimétrica do Vírus da lise celular induzida para determinar o ponto final de diluição. Este ensaio foi desenvolvido para os menos JAF e reagentes para uma alta taxa de Transferência para fins de maior número de amostras para testes. Algumas das limitações do ensaio de incluir os aspectos quantitativos da PRNT clássico.
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